固相萃取工作原理是利用選擇性吸附與(yu) 選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體(ti) 樣品溶液通過吸附劑，保留其中被測物質，再選用適當強度溶劑衝(chong) 去雜質，然後用少量溶劑迅速洗脫被測物質，從(cong) 而達到快速分離淨化與(yu) 濃縮的目的。固相萃取也可以將其近似地看作一種簡單的色譜分離過程。下麵以ac米兰体育的SPE-12固相萃取儀(yi) 為(wei) 例，簡單介紹固相萃取儀(yi) 的操作方法及步驟。
一、選擇SPE小柱或濾膜
首先，根據待測樣品的性質，選擇對其有較強保留能力的固定相，若待測樣品帶負電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料。若為(wei) 中性待測物, 可用反相填料萃取。SPE小柱或濾膜的大小與(yu) 規格應視樣品中待測物的濃度大小而定。對於(yu) 濃度較低的體(ti) 內(nei) 樣品, 一般應選用盡量少的固定相填料萃取較大體(ti) 積的樣品。
二、活化
萃取前先用充滿小柱的溶劑衝(chong) 洗小柱或用5-10ml溶劑衝(chong) 洗濾膜使SPE填料保持濕潤, 因為(wei) 填料幹燥會(hui) 降低樣品保留值，而各小柱的幹燥程度不一,也會(hui) 影響回收率的重現性。先用甲醇等水溶性有機溶劑衝(chong) 洗填料, 因為(wei) 甲醇能潤濕吸附劑表麵, 並滲透到非極性的矽膠鍵合相中, 使矽膠更容易被水潤濕；然後再加入水或緩衝(chong) 液衝(chong) 洗，創造和樣品溶劑相容的環境並提高回收率。
三、上樣
一般可采取以下四種方法：
(1) 用0.1mol/L 酸或堿調節, 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取；
(2) 用甲醇、乙腈等沉澱蛋白質後取上清液, 以水或緩衝(chong) 液稀釋後萃取；
(3) 用酸或無機鹽沉澱蛋白質後取上清液, 調節pH 值後萃取；
(4) 超聲15min後加入水、緩衝(chong) 液, 取上清液萃取。流速應控製為(wei) 1ml/min, 流速快不利於(yu) 待測物與(yu) 固定相結合。
四、淋洗
反相SPE的清洗溶劑多為(wei) 水或緩衝(chong) 液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個(ge) 小柱的容積, 而SPE濾膜為(wei) 5～10ml。
五、洗脫
應選用5～10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮幹後, 再用流動相重組殘留物後進樣。體(ti) 內(nei) 樣品洗脫後多含有水, 可選用冷凍幹燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體(ti) 積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離, 可調節pH 值, 抑製樣品離子化, 以增強待測物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時調節pH值使其離子化並用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液後再調節pH值使其在HPLC分析中達到*分離效果。在洗脫過程中應減慢流速,用兩(liang) 次小體(ti) 積洗脫代替一次大體(ti) 積洗脫, 回收率更高。
